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透析袋使用前如何处理

发布时间: 2020-04-29  点击次数: 430次

自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室简便常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4透析,升高温度可加快透析速度。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国Union Carbide (联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常为1万左右。
商品透析袋制成管状,其扁平宽度为23 mm~50 mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。可先用50%乙醇煮沸1小时,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明,50%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于4蒸馏水中,若长时间不用,可加少量NaN2,以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。 
新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
检查透析效果的方法是:用1% BaCl2检查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 检查NaCl、KCl等。
为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司(Biomed Instruments Inc.)生产的各种型号的Zeineh 透析器,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高

透析袋使用前如何处理
透析袋的使用前处理:
1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。
2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟。
3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。
5. 冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。
6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。

透析膜 (前处理方法如下):
1. 戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中 15 min 泡软。
2. 浸入 10 mM sodium bicarbonate 中,并加热至 80,一边搅拌至少 30 min。
3. 换到 10 mM Na2·EDTA 中浸泡 30 min,以新鲜的 EDTA 同样方法处理三次。
4. 再用 80 蒸馏水洗 30 min,然后换到 20% 酒精中,放在 4 冰箱中保存。

一、截留分子量(MWCO)说明:
由于透析膜由海绵状横向耦合的聚合物材料构成,截留性能间接的由孔径等级即截留分子量(MWCO)表示,截留率90%的溶质分子大小可更精确的表示膜的MWCO。然而,溶质的渗透性亦取决于分子形状、水合度、离子电荷与极性,我们推荐选择膜的MWCO为欲截留物质分子量的一半,两倍于透过物质的分子大小。
二、 透析袋膜材质说明:
1、生物技术纤维素酯(CE)膜
生物学惰性和超纯的生物技术CE膜提供广泛的可选孔径(9种)和尺寸,用于带电荷分子的分离及大分子纯化。3种尺寸中,生物技术CE膜对条件及溶剂要求较高。一般而言,CE膜能够抗弱的或稀的酸碱溶液和轻微乙醇,MWCO只有轻微改变。直接与有机溶剂接触会破坏CE膜。生物技术CE膜只能在pH2-9与4-37℃下使用。即用透析装置中也可使用CE膜。
2、生物技术再生纤维素(RC)膜
生物技术RC膜通过再生过程制得,物理抗性与化学相容性得到改良,具有与生物技术CE膜一样高纯度与均一的MWCO。RC膜能够与高浓度的弱酸碱、低浓度的强酸碱、大多数醇类及一些温和的或低浓度有机会溶剂共用,直接与强极性或有机会溶剂接触会破坏RC膜。生物技术RC膜能在pH2-12与4-60℃条件下使用。
3、标准等级再生纤维素RC膜:Spectra/Por 1-7
标准等级再生纤维素(RC)由从棉毛纤维提取的天然纤维素构成,可广泛应用于实验室透析。这种透明、柔韧的膜孔径均一且低廉、结实,非常适用于脱盐、缓冲液置换、大分子纯化及其他一般应用。由于具有广泛的化学相容性,标准RC膜能够与稀强酸碱液、高浓度的弱酸和弱碱、大多数醇类及一些温和的或低浓度有机溶剂(包括DMSO)共用,但与一些强有机溶剂接触可能会破坏RC膜,标准RC膜能够在pH2-12和4-121℃条件下使用。
三、 使用说明:
1、使用过程中请务必带上无裂缝的手套,使用后请及时洗手!
2、湿型透析袋保存时必须浸泡在0.05%叠氮钠防腐溶液中,失水后将不能使用!
3、美国美国光谱医学公司生产的透析袋大部分是预处理过的,基本不含硫化物和重金属离子,浸泡在0.05%叠氮钠防腐溶液中,使用前只需用冷却蒸馏水冲洗3次即可使用;若是干型的,是涂有甘油保护层,可在60℃左右的温水中浸泡10分钟后用冷却蒸馏水冲洗3次即可使用。请勿将光谱医学的透析袋放到沸水中煮沸或者放到有机溶剂中处理,以防损坏膜材质!
4、使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,推荐使用特制的透析袋夹子夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
一、透析的定义:
透析(dialysis)是指物质穿过膜的选择性扩散过程。可用于分离分子量大小不同的溶质,低于膜所截留阈值分子量的物质可扩散穿过膜,高于膜截留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另一侧。 
二、透析袋:
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,就叫做透析袋。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。比如蛋白质和DNA的脱盐浓缩,纳米材料的筛选,中药成分萃取后有机溶剂的去处等。 
三、透析方法
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为保留液,袋(膜)外的溶液称为渗出液透析液。通过多次更换透析液而去除盐和小分子物质
透析袋使用说明 
透析即用半透膜(透析袋)将大分子蛋白质分离出来。在生物大分子制备过程中除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品,透析法简单。
技术指标:MWCO(截留分子量),单位Diatoms。
透析时,小于MWCO的分子在透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下透过渗透膜、其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正比。欲快速渗透可采用直径较小的透析袋以增加膜面积。常用温度:4℃,升温、更换袋外透析液或用磁力搅拌器,均能提高透析速度。
使用须知
高精度即用型无须前处理,用蒸馏水冲洗即可使用。
注意:CE型材质较硬(洗涤时小心破裂)。
1. 某些化学物质会破坏透析袋微孔切不可逆转。计有:
烃、卤化烃、醇、酮、酯、胺、二氧杂环、等。
酸(甲乙酸、稀强酸如5%HCL),10%萘酚,
甲醇、乙醇:浓度小于5%时,透析袋功能在,而MWCO变化。
2. 蛋白质吸附量,小于1μg/克(以透析袋干重计)。
正常使用PH值5-9。
极限使用PH值2-12。
3. 前处理:煮沸5分钟后用蒸馏水60℃冲洗2分钟,置于4℃蒸馏水中待用。长期保存液:0.05%-1%叠氮钠,1mMEDTA或50%甘油,温度(4℃),使用前以蒸馏水洗净。
4. 即用型透析袋无需前处理,使用前用蒸馏水冲净即可。
5. 透析袋装液时应留1/3-1/2空间,以防透析过程中,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破(含盐量高的蛋白质溶液透析过ye时,体积增加50%系正常情况)。
6.使用时需带手套
7.透析效果检查用

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