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PCR仪中的PCR反应过程你知道吗?

发布时间: 2020-05-06  点击次数: 89次
   PCR仪根据DNA扩增的目的和检测的标准可以分普通PCR仪、梯度PCR仪、原位PCR以及实时荧光定量PCR仪等几类。
  一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的,对目的基因退火温度的扩增。主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
  PCR仪的PCR反应过程与细胞内的DNA复制相似,但PCR的反应体系要简单的多,主要包括DNA靶序列、引物、4种单核苷酸dNTP、耐热DNA聚合酶以及合适的缓冲液体系。
  PCR反应过程有以下3个步骤:
  1.变性
  将反应体系混合物加热到94℃,维持较短时间(大约15-30 s),使目标DNA双螺旋的氢键断裂,形成单链DNA作为反应模板。
  2.退火
  将反应体系冷却至特定的温度(引物的TM值左右或以下),引物与DNA模板的互补区结合,形成模板引物复合物。
  3.延伸
  将反应体系的温度提高到72℃并维持一段时间,引物在耐热聚合酶的作用下,以引物为固定起点,以4种单核苷酸(dNTP)作为底物合成新的DNA链。
  以上三步骤作为一个循环重复的进行,每一循环的产物作为下一循环的模板。如此循环数十次,从而使目的基因得到指数级扩增,达到检测或获取基因的目的。
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