Chromotek精品系列--源于羊驼的纳米抗体

德国 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究，公司拥有强大的研发团队，有先进的生物制剂，主要主要使命是花费较少的时间和成本，使客户获得得高质量的实验数据。
ChromoTek的产品分类：
一、Nano-Trap系列；以产品结合物为标准，包含磁珠系列和琼脂糖珠子系列，还有96板系列；抗体结合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 实验的Chromobodies(质粒或细胞系形式)；
四、  高品质抗体（标签蛋白抗体和普通抗体）

由一个重链可变区组成的羊驼单域抗体，是目前可以得到的具 有完整功能的稳定的可结合抗原的小单位。分子量仅15 kDa,是 常规IgG抗体分子量的1 /10。

分子量小

»分子量仅15 kDa,是传统IgG抗体(150 kDa)的1 /10,或Fab片段(50 kDa)的1/3

»结构简单稳定，仅一个重链可变区，特异性强

应用广泛

»免疫沉淀、免疫荧光、超分辨率成像、表面等离子体共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技术等

穏定性高

»热稳定性高，可常温运输

»化学稳定性高，可忍受苛刻的缓冲及洗脱条件

多重验证

»序列明确，结构清晰

»应用验证

» SCI文献引用

亲和力高

»表位结合能力强，不受空间环境影响

»更高的组织穿透力

Y Nano-Traps

GFP-Trap —免疫沉淀伴侣

产品特色:

»结构稳定——不会断裂，无普通抗体轻链与重链污染

»性质稳定——耐高温，耐苛刻的孵育条件和洗脱条件

»亲和力高——抓捕牢固不易脱落，可显著缩短反应时间

应用领域：

» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP

» Mass spectrometry (MS)

» Enzyme activity measurements

» ChIP, RIP, iCLIP 分析

识别GFP衍生物：

» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy

GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder

GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A

» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet

» CFP

» BFP

▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound

Y Spot-Tag®

Spot-Tag® （序列PDRVRAVSHWSS）是基于Spot纳米抗体的优化试剂，用于多种捕获和检 测应用中。

优势

»通用肽标签，适用范围广泛

»针对内源水平的标签蛋白进行了优化

»纳米抗体技术实现高性能

Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS

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Screened and mutated positions

应用

IP/Co-IP: Spot-Trap®

•单带纯化：下游应用中无轻链和重链

•高亲和力，N端或C端融合的解离常数KD低至6-7 nM

• 65°C高稳定性，可耐pH范围4-10

•树脂的结合能力2 1.4mg /ml （对于30 kDa的蛋白质）

IF/ WB: Spot-Label

偶联ATTO594的抗Spot-Tag期米抗体

•更小的连接误差,更好的组织穿透力

•成像性能优异

-用于WB极度敏感

Protein purification: Spot-Cap

基于期米抗体的亲和树脂

•一步法纯化蛋白

Nano-Boosters & Nano-Labels是一类荧光探针,通过将靶标蛋白的羊驼单域抗体VhH与荧光染料偶 联在一起，Nano-Boosters能够增强GFP、RFP等荧光蛋白的信号强度，Nano-Labels则能够更准确的定 位到靶标蛋白位置。

优势

»增强荧光信号，成像效果更出众

»荧光基团位移偏差小，定位更准确

»结构小巧且稳定，通透性更佳

应用

»免疫荧光（IF）

»免疫细胞化学（ICC）

»免疫组织化学（IHC）

»组织透明三维成像（DISC。）

»超分辨显微成像（SPM）

Nano-Caps是纳米抗体/VhH偶联的琼脂糖珠,可以高效的进行一步法纯化蛋白。

优势

» 一步法纯化蛋白

»高结合力

»可重复使用

»洗脱温和

应用

»蛋白纯化

Chromobodies®是一种荧光纳米探针，通过将羊驼单域抗体VhH与荧光蛋白的基因序列融合在一个重组 质粒来实现内源性靶标蛋白在活细胞内的可视化和实时分析。

优势

»结枸小巧稳定，易于转化表达

»活细胞成像，内源性靶标实时分析

»超分辨显微成像，高通量分析

»不干扰内源性靶标蛋白功能

应用

»高通量分析(HCA)

»免疫荧光(IF)

»活细胞成像(Live cell)

»超分辨显微成像(SPM)

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Nanobodies / VhHs

GFP VhH 是否结合 protein A 或者 protein G ?

GFP VhH 结合 protein A 但不结合 protein Go

Nano-Traps

GFP-Trap®对于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在亲和力上是否有差别？

GFP-Trap®对于C端GFP融合蛋白有稍微更高的亲和力。可以通过延长孵育时间（15-30min延长至l-2h）来补偿这个差别。

能否用GFP-Trap®直接从组织样品（例如位于变性缓冲液）中来纯化带GFP标签的融合蛋白？

理论上来说GFP-Trap®在苛刻的缓冲液体系（例如含有0.1% SDS或者1M尿素的RIPA ）中恨稳定。

洗脱的GFP-结合蛋白是否会与lg二抗发生交叉反应？

GFP-Trap®申的结合蛋白与山羊、小鼠、大鼠或者人的抗体没有任何同源性，所以不会与lg二抗发生非特异性交叉反应。

GFP-Trap®的载量如何？

通常 GFP-Trap® Agarose 和 GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩 L 悬浮液可以结合 8 卩 g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩 L 悬浮液可以结合1 pgGFPo

Myc-Trap是否识别内源性的c-Myc蛋白？

我们尚未发现Myc-Trap可以识别内源性的c-Myc蛋白。由于在c-Myc蛋白的三维结构申对于结合Myc-Trap至关重要的一些抗 原表位被隐藏了，所以在非变性条件下a-Myc蛋白很难被Myc-Trap识别到。

如何将带Myc标签的融合蛋白从Myc-Trap上温和的洗脱下来？

可以用lx或者2x Myc-peptide竞争性的洗脱。替代性的也可以用8M尿素或者pH2.5的0.2M甘氨酸室温下洗脱。

Spot标签该构建到目的蛋白N端还是C端？能否将Spot标签插入到目的蛋白中间？

N端或者C端都能够很好的识别。

对于Spot标签插入到目的蛋白中间的得视情况而定。Spot标签多肽需要以线性形式存在而且目的蛋白需要易进入不能有空间阻 碍。需要插入到足锯大且无结构的环，或无固有结构的区域或较长的linker,才能锯被Spot标签抗体识别。

在还原状态下该如何将带Spot标签的融合蛋白洗脱下来？

可以用Spot标签多肽竞争性的洗脱，或者也可以用pH 1210mM NaOH洗脱（洗脱之后需立即调整pH ）。