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多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用

发布时间: 2022-08-24  点击次数: 42次
  多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用
  如何将传统分子检测方法变的更加简单易懂、操作方便和快速精准。一直是分子检测行业的一大课题。各个厂家和科研院所都在这方面投入了大量的时间和金钱。
  在荧光检测领域,MIRA技术将60分钟以上的核酸扩增阶段,缩短到20分钟。其开发了“核酸胶体金试纸条检测法”,可彻底抛弃掉高昂的检测设备,仅需配备简单的温控仪器即可(如金属浴、水浴锅等),甚至42°温水和利用人体温度亦可完成扩增反应,且核酸扩增时间进一步缩短到10分钟不到。其结果的准确率与传统PCR检测方式准确率一致。
  具体操作方法如下:
  1.采用我司自主开发的快速核酸扩增试剂提取核酸(核酸提取剂与样本混匀,室温静置5分钟即可取上清作为核酸模板),或者采用市场常见“离心柱法”和“磁珠法”提取核酸作为模板亦可;
  2.取上述模板2μL加入到复融后的反应液中,通过上述各种加热手段,保证加热温度在37°~42°之间10分钟即可。
  3.上述反应时间结束后,向反应液中加入少许无菌水稀释,后直接插入试纸条,则马上可通过试纸条上的条带颜色变化,从而判定阴阳性。
  自主研发用时,引物设计注意事项:
  核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计:在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列;5’端修饰一个抗原标记(典型FAM);5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF);3’端标记一个修饰基团,如胺基、生物素或C3-Spacer,同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。
  该方法极其适用于现场核酸提取。可应用于传染病初筛、食品安全、宠物疾病检测、活体市场抽检等各种不具备完整分子检测条件下的核酸测试。对操作人员专业水平要求低,检测结果可信度高。
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