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NEB内切酶的对照实验怎么做

发布时间: 2022-09-26  点击次数: 104次
  NEB内切酶的对照实验怎么做
  NEB内切酶可提供210多种内切酶,其中有130多种内切酶为重组酶。重组技术的运用,使NEB能在提高内切酶的纯度及品质的同时,削减生产费用。
  加入酶之前将反应混合物混匀,可以用移液枪上下吹打或轻弹管壁,然后在离心机中快速离心。切忌振荡混匀。
  一般情况下,我们推荐使用5-10单位酶量/μgDNA,基因组DNA用10-20单位酶量消化1小时。入内切酶的量应不超过总体积的10%,以避免甘油过量引起的星号活性。贮存液中的添加物和底物溶液中尚存的残余物(会导致小体积反应出现问题。如果在切割底物DNA时遇到了问题,建议加入以下对照实验:
  1、酶切对照DNA(含有多个已知内切酶切割位点的DNA,如LambdaDNA或腺病毒-2DNA),以检测内切酶的活性。
  2、如果对照DNA能够被切割而实验中的底物DNA不能,可以将这两种DNA混合在一起再进行酶切,以检测实验用的底物DNA中是否存在抑制反应的物质。如果确实存在某种抑制因子(通常为盐、EDTA或酚),则混合之后对照DNA也不能被切割。
  3、当内切酶在非zui适条件下使用时可能会产生星号活性。
  4、可以通过以下方法降低星号活性:使用高保真(HF)内切酶、缩短温育时间、使用省时内切酶或者增大反应体积。
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