二代测序(Next-Generation Sequencing,NGS)是指使用高通量平台同时对大规模DNA或RNA进行快速、准确、低成本的测序技术。在这个过程中,二代测序酶起到了重要作用。
二代测序酶主要分为两类:聚合酶和核苷酸转移酶。
1. 聚合酶
聚合酶是进行DNA扩增的关键工具,在PCR (Polymerase Chain Reaction) 过程中发挥着重要作用。其中最常见的是Taq DNA polymerase和Phusion DNA Polymerase两种。
Taq DNA polymerase即热稳定型聚合酶,能够耐受较高温度条件下的反应,并且扩增产物含有A尾巴(Adenines),适用于目标片段长度较短且含有AT富集区域时使用;而Phusion DNA Polymerase则由多个不同来源的DNA polymerases组成复杂结构体系,在保证特异性与灵敏度基础上, 具备更好的扩增效率、精准性及拓展模板长度等优点。
2. 核苷酸转移 酶
核苷转移脱氧核糖体(Nucleotide Transfer and Deoxyribonucleotide Transfer)也称为内切酶,是一类蛋白质酶,在DNA测序过程中扮演着重要的角色。这些内切酶可以短小地识别和结合到DNA上,并在特定核苷酸位点处水解化学键,释放出部分碱基或其它标记物。
总之, 二代测序酶作为高通量平台进行快速、准确、低成本的基因组学研究所必备的关键工具, 具有极其重要和不可替换的作用。