技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > 默瑞生物提供近岸系列体外合成酶及试剂,解决mRNA疫苗的关键痛点

默瑞生物提供近岸系列体外合成酶及试剂,解决mRNA疫苗的关键痛点

发布时间: 2021-06-24  点击次数: 119次

  QQ截图20210616142302.jpg

默瑞生物提供近Novoprotein近岸蛋白质一系列mRNA体外合成酶及试剂,解决mRNA疫苗的关键痛点。所有产品均采用药用规格原辅料生产,严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留及常见病原体污染,符合GMP规范的产品生产与质量管理规程,保障生产过程及所有原辅料可追溯。

  产品特点:

  *GMP级mRNA体外合成及修饰原料,animal-free,ampicillin-free

  *产品生产、质量控制及配套文件体系,符合mRNA疫苗及药物研发生产需求

  *经过临床使用验证,单批次产能千万人份,年产能50亿人份

1.png

  mRNA疫苗的成功需要保证mRNA的稳定性和高效翻译效率以及mRNA的大量生成。

  1、生成模板-质粒线性化 相关产品:Bsa I,GMP Grade(货号:GMP-RE026)

  此步将构建好的质粒酶切,处理成线性化双链DNA模板,用于下一步mRNA合成。

  限制性内切酶Bsa I 特异性识别双链DNA中位点并进行酶切,可将模板质粒酶切线性化,作为mRNA体外合成模板;

  酶切位点:

图片1.png

  产品特点:

  强特异性

  受CpG、Dcm甲基化影响,剪切阻断

  受EcoBI甲基化影响,剪切可能受影响

  不受Dam甲基化影响

  2、mRNA体外合成

  此步以DNA为模板,在体外由RNA聚合酶催化合成mRNA。

  T7 RNA Polymerase(T7 RNA聚合酶)是高度特异识别T7启动子序列的5'→3' RNA聚合酶,以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。T7 RNA聚合酶是体外转录mRNA的关键酶。

  产品特点:

  高度特异识别T7启动子

  20ul反应体系,产量可达150ug

  可对低至1ng模板进行有效转录

  合成长度可达15k

图片2.png

  体外转录产生的mRNA,Qsep1结果显示,纯度高,均一性好。

  3、mRNA转录后修饰:加帽加尾

  此步对mRNA进行修饰,合成功能完整的mRNA。

图片3.png

  完整mRNA结构

  3.1、mRNA加帽(Cap0)   

  此步与3.2同时进行,在mRNA的5'端加上Cap0帽结构,再将Cap0转化为Cap1结构。

  在真核生物中,转录后的mRNA必需经过一系列修饰才能形成完整的结构,即在5'端形成一个帽子结构(Cap1),3’端形成PolyA尾结构。这些结构与mRNA的稳定、转运和翻译密切相关。

  Vaccinia Capping Enzyme(牛痘病毒加帽酶)用于给体外转录合成的mRNA催化加上帽子结构(Cap0),显著改善mRNA的稳定性和翻译能力,使mRNA可在细胞内表达蛋白,避免核酸外切酶等的降解破坏。

  mRNA的帽结构是由一个7-甲基鸟苷通过一个5′–5′三磷酸酯桥连接到mRNA 链的5′核苷上组成。Cap-0结构由相邻的RNA链通过三种酶的依次反应形成。进一步形成cap-1结构需要2-O甲基转移酶(Cat. No: GMP-M072, Novoprotein)参与,该修饰可以降低RNA在体内引起的细胞先天免疫反应。

  产品特点:

  高效完成mRNA加帽Cap0

  提高mRNA的稳定性,防止被RNA酶降解

  提高mRNA的翻译效率,提高蛋白产量

  3.2、mRNA加帽(Cap1)

  此步与3.1同时进行,在mRNA的5'端加上Cap0帽结构,再将Cap0转化为Cap1结构。

  真核生物中,mRNA的转录后须经系列修饰,在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,3’端形成PolyA尾结构。这些结构与mRNA的稳定、转运和翻译密切相关。已知Cap1结构存在于所有真核生物mRNA,在稳定mRNA结构和提高翻译效率方面起重要作用。研究表明,体外转录修饰得到的Cap1结构mRNA更不容易被免疫系统的RNA感受器(RIG-I)识别,因此免疫刺激更低。

  mRNA Cap 2´-O-Methyltransferas (2´-O-甲基转移酶)可利用 S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体, 在 RNA 5´末端紧邻帽结构(Cap 0)的第一个核苷酸的 2´-O 上添加甲基基团,形成带有 Cap 1 结构的 mRNA。Cap1 结构能增强 mRNA 的翻译效率,从而可提高转染后 mRNA 编码的蛋白表达水平。该酶只能以带 7-甲基鸟苷帽结构(m7GpppN)的 RNA 为底物,不会作用于 5´末端为pN、ppN、 pppN 或 GpppN 的 RNA。带 7-甲基鸟苷帽结构(m7GpppN)的 RNA 可通过 Vaccinia Capping System(Cat. No: GMP-M062, Novoprotein)来制备。

  产品特点:

  使mRNA的Cap 0帽子甲基化为 Cap 1帽子

  提高 RNA 的翻译效率,提高蛋白产量

  进一步降低免疫原性

图片4.png

  完整mRNA在细胞内表达GFP蛋白,加帽酶与帽类似物对比

  3.3、mRNA加尾(PolyA)

  此步在mRNA的3'端加上PolyA尾。

  真核生物中,mRNA的转录后须经系列修饰,在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,3’端形成PolyA尾结构。这些结构与mRNA的稳定、转运和翻译密切相关。Poly A与成熟mRNA的稳定性、翻译起始以及出核运输有关,体内转录后修饰中,polyA聚合酶在RNA 3’-OH上逐一引入100-200个A碱基。

  体外转录RNA过程中,E. coli Poly (A) Polymerase(加尾酶) 不依赖模板的存在,可以催化 ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端,即在 RNA 的 3´末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率,可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。 还原体内加尾过程。

  产品特点:

  稳定mRNA的存在形式

  引导转录终止

  提高RNA在真核细胞中的翻译效率

  4、其他相关产品

  4.1、防止mRNA降解

  在流程2-3 mRNA合成与修饰中加入RNase Inhibitor,防止RNA降解。

  RNase Inhibitor可与RNase A形成1:1复合体,对RNase 有极强非竞争性抑制,保护mRNA转录后不被降解

  产品特点:

  强抑制RNase活性

  稳定性强

  4.2、降解模板DNA

  在流程2 RNA合成结束后,去除模板DNA。

  DNase I将单链或双链DNA随机分解。

图片5.png

  DNase I 去除RNA样本种的DNA残留

  4.3、增加mRNA产量

  在流程2 RNA合成过程中加入无机焦linsuan酶,增加RNA产量。

  无机焦linsuan酶PPase(Pyrophosphatase, Inorganic)可催化无机焦linsuan盐水解生成正linsuan盐(P2O7-4+H2O+PPase→2HPO4-2),一方面可去除无机焦linsuan盐对反应体系的抑制,另一方面为反应提供热力学动力,促进产物的生成。常用于RNA、DNA、蛋白质的生物合成中,是一种良好的辅剂,在mRNA疫苗体外大规模合成中加入可显著提高产量。

图片6.png

  无机焦磷酸酶去除mRNA合成过程中产生的焦磷酸,提高mRNA产量

  相关清单

  

图片7.png

默瑞(上海)生物科技有限公司,作为专业的生命科学产品推广与服务商,以“创新,专业,共赢”的理念,不断强化服务体系,提升客户体验,结合国内外优质产品提供高标准完整解决方案,帮助科研客户和生物技术企业高效创新,加速转化,创造更多优质产品,提升社会福祉,实现多方共赢。

默瑞生物创立以来,已经陆续导入TwistDx,BACPAC,博日,Celexplorer

DiscoverX,Canvax,Jackson,izon,Biontex,Immunostep,101Bio,enzymatics,AATBioquest,KAPABIOSYSTEMS,BioDynami,Echelon,ChromoTek,Nanocs,Biotechrabbit,LeeBiosolutions, Novoprotein,magtivio等优质国际品牌,逐步培育成为专业用户的选择。

 

上一篇:内切酶的酶切技术实验原理值得关注!
下一篇:没有了
在线客服 联系方式

服务热线

4006-400-850