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PCR仪的扩增产物出现多条带问题解析

发布时间: 2020-10-23  点击次数: 26次
   PCR仪是利用DNA聚合酶用于扩增特定的DNA的片段,对特定基因做体外大量合成,可以将一段基因复制为原来的百亿至千亿倍。利用酶融合技术,梯度PCR仪可获得更快、更好结果;其可灵活配备96和384孔加热模块并具优异的梯度功能,用于加速实验方案开发。7"高分辨率触摸屏,配备智能向导,帮助您根据实验室条件创建适合的PCR实验方案。
  PCR仪的扩增产物出现多条带,这是怎么回事呢?
  1.引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。
  2.循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。
  3.酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。
  4.退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
  5.样品处理不当。
  6.Mg2+浓度偏高,因适当调整Mg2+使用浓度。
  7.若为PCR试剂盒,也可能时试剂盒本身质量有问题。
  8.复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。
  9.反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。
  10.引物特异性差。检查引物特异性或重新设计引物。
  11.引物量过多。减少反应体系中引物的用量。
  12.模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。
  13.外源DNA污染。确保操作的洁净。
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